一、塔板理論的基本假設
塔板理論是Martin和Synger首先提出的色譜熱力學平衡理論。它把色譜柱看作分餾塔,把組分在色譜柱內的分離過程看成在分餾塔中的分餾過程,即組分在塔板間隔內的分配平衡過程。塔板理論的基本假設為:
1)色譜柱內存在許多塔板,組分在塔板間隔(即塔板高度)內*服從分配定律,并很快達到分配平衡。
2)樣品加在第0號塔板上,樣品沿色譜柱軸方向的擴散可以忽略。
3)流動相在色譜柱內間歇式流動,每次進入一個塔板體積。
4)在所有塔板上分配系數相等,與組分的量無關。
雖然以上假設與實際色譜過程不符,如色譜過程是一個動態過程,很難達到分配平衡;組分沿色譜柱軸方向的擴散是不可避免的。但是塔板理論導出了色譜流出曲線方程,成功地解釋了流出曲線的形狀、濃度極大點的位置,能夠評價色譜柱柱效。
二、色譜流出曲線方程及定量參數(峰高h和峰面積A)
根據塔板理論,流出曲線可用下述正態分布方程來描述;
C=e或C=e
由色譜流出曲線方程可知;當t=tR時,濃度C有極大值,Cmax=.Cmax就是色譜峰的峰高。
因此上式說明;①當實驗條件一定時(即σ一定),峰高h與組分的量C0(進樣量)成正比,所以正常峰的峰高可用于定量分析。
②當進樣量一定時,σ越小(柱效越高),峰高越高,因此提高柱效能提高HPLC分析的靈敏度。
由曲線方程對V(0~∞)求積分,即得出色譜峰面積A=×σ×Cmax=C0。可見A相當于組分進樣量C0,因此是常用的定量參數。把Cmax=h和Wh/2=2.355σ代入上式,即得A=1.064×Wh/2×h,此為正常峰的峰面積計算公式。
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