色譜標準品不出峰或者出兩個峰是怎么回事
情況一:HPLC測定槲皮素和奈酚時,按照文獻將色譜條件設定為檢測波長360nm,柱溫30度,流速1ml/min,流動相是甲醇-0.2%磷酸溶液(45:55).標準品用液相色譜甲醇超聲溶解定容,微孔濾膜過濾后注入液相色譜儀,但是就是看不見峰,文獻上槲皮素在該條件下是10.3mim出峰,奈酚在系統條件下13.67min出峰.把測定時間設定為30min,但在30min中內
色譜標準品沒有任何峰出現。
情況二:用的衍生試劑是異硫氰酸苯酯(PITC),流動相a是醋酸鈉溶液,流動相b是乙腈溶液。檢測條件:色譜柱:C18-AQ柱,柱溫25℃;流動相:甲醇:水=5:95;流速:1ml/min;紫外檢測器,檢測波長:280nm,進樣量:10ul。做液相色譜谷氨酸色譜標準品總是出兩個分不開的峰是什么原因?
色譜標準品不出峰或者出兩個峰分析原因:
1、不同的色譜柱,保留差異會很大。建議是:將甲醇的比例增大,比如70:30,再根據主峰的保留時間調整比例,直到分離結果滿意。
2、標準品選用的溶劑溶解不適合,或者溶劑對樣品溶解過程中出現異構化。
3、如果用到衍生劑可能是因為衍生劑衍生不夠*,或者衍生劑降解或者變質。
4、使用的檢測器不適合于分析。
5、有可能是色譜柱污染,你可以再生柱子;
6、可以適當調整流動相的pH;
7、提高色譜柱柱溫;
8、
色譜標準品采用梯度洗脫方式。